辛毅，刘小希，赵伟，刘飒，李娜，许秀芳，黄益民，罗毅，张宏家*【摘要】摘要本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(MesenchymalStemCells，MSC)和内皮祖细胞(EndothelialProgenitorCells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓，应用密度梯度分离单个核细胞，采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC。用台盼蓝法测定细胞传代成活率，通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC;细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1，并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度。结果表明，经密度梯度分离单个核细胞，在早期贴壁细胞24h换液时即可见明显集落形成,8d后达80%融合，细胞呈均匀一致的长梭形排列；2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8d可融合近80%，细胞呈多角形，出现条索状结构；2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90%以上，传至第2代后，生长曲线均近似\"S”形；MTT法检测显示，细胞生长d3至d5时光密度值变化较明显；MSCG0-G1期为(93.32±1.65)%、EPCG0-G1为(93.05±1.95)%，2种细胞DNA周期无明显差异；早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)%、(99.1±2.33)%；CD14、CD45、CD79a阳性率分别为(4.8±0.38)%、(6.8±0.49)%及(0.4±0.08)%，经体外诱导能够向成骨细胞及脂肪细胞分化，鉴定为MSC；2次贴壁细胞传至第2代经